產(chǎn)品中心
Product Center當(dāng)前位置:首頁產(chǎn)品中心實驗技術(shù)服務(wù)動物模型構(gòu)建過敏性哮喘動物模型
動物哮喘模型:是達為科生物較為成熟的動物模型之一,由動物平臺經(jīng)驗豐富的實驗員操作完成。
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產(chǎn)品分類過敏性哮喘動物模型實驗服務(wù)介紹:
BALB/c小鼠于第0天和第14天分別腹腔注射OVA液和DBP溶液,第21~23天連續(xù)3天以O(shè)VA溶液霧化激發(fā),每天于上午下午固定時間霧化2次,每次20min。霧化過程中觀察小鼠一般行為變化,后一次霧化結(jié)束后24小時,小鼠摘眼球取血,取支氣管肺泡灌洗液及肺組織。
一般行為學(xué)觀察 觀察小鼠在霧化過程中是否出現(xiàn)撓臉、毛發(fā)豎立、呼吸急促、煩躁不安、大小便失禁等現(xiàn)象。
血中Eos計數(shù) 后一次霧化激發(fā)結(jié)束24h后,小鼠摘眼球取血,獲得血液后立即取出20 μl與380μl 嗜酸性粒細胞稀釋液混勻,利用細胞計數(shù)板于光學(xué) 顯微鏡下進行Eos計數(shù)。
血清中IgE測定 將獲得的血液靜置2h后,離心,3500 rpm,15min,取血清,按IgE ELISA試劑盒說明書進行測定,并通過樣本總蛋白含量進行結(jié)果校正。
BALF細胞分類計數(shù) 將小鼠仰臥位固定,打開胸腔后,結(jié)扎右肺及左側(cè)肺上葉。分離并暴露氣管,用適宜針頭進行插管,以預(yù)冷PBS反復(fù)灌洗肺組織(0.5 mL/次,共兩次),收集BALF,低溫離心( 3500 rpm,10min ),取上清,保存于-20℃待測。細胞沉淀用0.2 mL預(yù)冷PBS重懸,吹打均勻后取10 μl于細胞計數(shù)板上在光學(xué)顯微鏡下計細胞總數(shù),剩余細胞懸液涂片,用快速瑞姬氏染液染色,顯微鏡下進行細胞分類計數(shù)。
BALF中IL-4、IL-5、IL-9、IL-13、IFN-γ的測定 將獲得的BALF上清根據(jù)相關(guān)細胞因子檢測試劑盒的說明書進行各指標(biāo)定量檢測,測定結(jié)果經(jīng)總蛋白含量校正。
肺組織中IL-4和IFN-γ的測定 將右側(cè)肺組織用預(yù)冷的PBS研磨得15 % 組織勻漿,低溫離心,3500 rpm,15min,取上清按照 ELISA 測定試劑盒的操作步驟進行IL-4和IFN-γ測定,并通過樣本總蛋白定量來進行校正。
肺組織HE及PAS染色 剪取左肺上葉,置10%中性福爾馬林中固定,石蠟包埋,常規(guī)石蠟包埋,切片,HE及PAS染色,鏡下觀察肺組織炎性細胞浸潤及黏性蛋白增生情況。
分子實驗平臺:高效運作了qRT-PCR、Western blot、雙向電泳技術(shù)、分子克隆與質(zhì)粒構(gòu)建、流式細胞儀檢測、免疫共沉淀、染色質(zhì)免疫共沉淀、RNA免疫沉淀、凝膠電泳遷移實驗、酶聯(lián)免疫吸附測定、外泌體抽提及鑒定等實驗。
基因組學(xué)平臺:可以完成甲基化檢測、基因芯片分析、高通量測序等實驗。
蛋白組學(xué)平臺:能實現(xiàn)LC-MS、ITRAQ、蛋白質(zhì)修飾分析等重點實驗項目。
病理學(xué)平臺:涉及免疫熒光染色、免疫組織化學(xué)染色、HE染色、特殊染色等實驗。
臨床前CRO服務(wù):主要提供呼吸系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)性疾病的藥效學(xué)評價服務(wù),包括靶點驗證、體內(nèi)外模型的構(gòu)建、藥物篩選、藥物分析、藥效性評價、藥代
動力學(xué)和藥理學(xué)研究以及院內(nèi)制劑研發(fā)等。
項目轉(zhuǎn)化服務(wù):助力客戶進行方案設(shè)計、聯(lián)合課題申報、藥物項目引進和孵化,解決客戶對實驗技術(shù)平臺、專業(yè)人和融資的需求。